重水素化クロロホルム
13.4.4 計器性能の評価と維持
実験室認証（分析室向けのISO17025など）に用いられる品質管理システムには、一定の間隔で計器性能を評価し維持しなければならない。 これらの認証により、研究所の分析科学者は、装置の使用目的に応じて運転資格（OQ）および性能資格（PQ）試験を作成することができる。 したがって、NMRの場合、OQ/PQ試験は装置で実施される一般的な分析試験によって異なる可能性があります。 最新の装置では、ユーザーが適切な試料を挿入する必要があり、その後、一連のテストが自動で実行されます。
水溶液中のタンパク質治療薬の検査では、これらのOQテストに温度校正、重水素化クロロホルム中のアセトン信号のラインシェイプ、重水素化クロロホルム中のエチルベンゼン信号の感度、2mMスクロース溶液のアノマー原子の感度評価による水抑制を含める必要があります。 温度校正は、タンパク質のダイナミクスが周囲の溶液条件に影響され、観測されるシグナルの線幅や周波数に大きな影響を与えるため、重要である。 NMR 装置の試料温度調節は、プローブの空気温度と流速を注意深く制御することに依存している。 プローブエアーが試料温度に与える影響は、100%メタノールまたは100%エチレングリコール溶液の化学シフトを測定することで知ることができる。
良好な試料シミング(試料の観察部分全体に均一な磁場をかけること)がスペクトルの質に与える影響は、強調してもし過ぎることはない。 具体的には、信号抑制技術を用いる場合、抑制するピークの底辺が狭いほど、プリサチュレーションや狭帯域選択的な信号抑制技術が有効に働くことになる。 幸い、フィールドマッピング技術やグラディエントシミングの登場により、試料ごとにシム設定を調整するという、時間のかかる作業が簡略化された。
標準試料による分光器の感度の評価は、システム性能を追跡する理想的な方法であり、標準テストから得られる値は、メーカーが設定した分光器の仕様を満たすか上回るものでなければなりません。 注目すべきは、装置が設置時にこれらのテストに合格することを保証するために、メーカーが分光器の仕様を保守的に設定することが多いことです。 しかし、OQ/PQテストを定期的に実行することで、分光器の所有者は、その特定の装置の能力に精通することができます。
有機溶媒中の低分子分析の場合、重水素化クロロホルム中のアセトンシグナルを使用して、ローレンツ線状と狭いFWHHだけでなく狭いベース（たとえば、13C-サテライトシグナルの20％で<20 Hz）を達成することは、重水素化クロロホルム中のエチルベンゼンシグナルで最高の感度になることが一般的です。 水溶液中のスペクトルを得るために使用される分光器では、2番目の感度測定がより重要で、水のピーク付近の信号から良好な感度と分解能を得ることができる。 したがって、95%H2O/5%D2O溶液中の2mMスクロースからなる標準試料に水分サプレッションをかけたときのアノマープロトン信号の感度測定は、タンパク質治療用試料のNMRにおける分光器のS/N性能の測定としてより現実的であると言える。 そこで、2次元構造マップ解析を行う分光器のPQとして、15Nまたは13C同位体濃縮試料を用いて短時間に2D-HSQCスペクトルを実行し、効率的なデカップリングスキームとグラジエントコヒーレンス選択によるパルスプログラムを実行する分光器の能力を確立することができる。 密閉チューブ入りの13Cまたは15N同位体濃縮タンパク質（例えば、SH3ドメインタンパク質またはユビキチン）標準溶液は、数時間でデータを収集できる濃度で市販されています。 500 MHz以上で適切に較正され、クライオプローブを備えた分光計は、2-3日の分光計時間で、約1.0 mM濃度の自然存在量（すなわち、同位体濃縮されていない）タンパク質の2次元構造マップを測定することができる.
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